换一批羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达
Cloning of SRK13-b Gene of Ornamental Kale (Brassica oleracea var.acephala) and Prokaryotic Expression of Kinase Domain of SRK13-b
摘要目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化.方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RTPCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1 mmol/L IPTG诱导,用Ni-NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化.结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571 bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE显示相对分子质量约43×103的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白.结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础.
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DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2010.02.015
发布时间
2010-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30900115）
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