抗体Fc片段特异寡核苷酸配基介导的实时定量免疫PCR

Oligonucleotide Ligands Specific for the Fc Fragment of IgG Mediated Real-Time Quantitative Immuno-PCR

二维码有效期 120s

摘要目的:利用小鼠IgG抗体Fc片段高特异、高亲和寡核苷酸配基,构建实时定量免疫PCR检测方法,提高抗体检测的灵敏度.方法:用SELEX技术从随机寡核苷酸文库中筛选抗体Fc片段特异寡核苷酸配基,设计合成信标序列,通过不对称PCR法,制备IgG Fc片段的核酸信标配基分子；32p标记核酸信标配基,采用琼脂糖凝胶阻滞双显色法鉴定核酸信标配基与IgC Fc片段结合的素和力和特异性；制备IgG Fc特异性寡核苷酸信标配基-抗体复合检测分子,构建小鼠IgG Fc片段特异核酸信标配基介导的实时定量免疫PCR检测方法.结果:制备了IgG Fc片段的核酸信标配基分子；凝胶阻滞放射自显影和考马斯亮蓝二次染色结果显示该核酸信标配基分子与IgG Fc片段具有高度亲和力和活性,而且只与非变性IgG结合,与变性IgC不结合；IgG Fc片段的特异核酸信标配基与IgG结合形成复合检测分子,有效完成了信号传递和实时定量PCR信号放大过程.结论:初步建立了一种全新的核酸信标配基介导的免疫PCR检测方法,可有效提高现有IgG类抗体免疫检测的灵敏度和特异性.