换一批石蜡组织荧光原位杂交关键实验步骤探讨
Comparative Study on the Different Step of Fluorescence in Situ Hybridization in Paraffin Slides
摘要目的：探讨石蜡组织荧光原位杂交（FISH）技术中关键实验步骤的最佳条件，以期提高石蜡切片FISH阳性细胞检出率和实验成功率。方法：在前期标本处理方面，进行双蒸水、0.5×SSC溶液、0.1%硫代亚硫酸钠溶液煮沸对比；在蛋白酶消化方面，设置胃蛋白酶和蛋白酶K两种消化方法，并在37℃条件下设置时间的梯度变化，比较其消化效果；对石蜡切片的变性设置温度梯度，比较杂交检出率；比较DAPI复染时不同浓度对单色、双色FISH结果的影响；应用抗淬灭剂后不同保存时间的对比。结果：采用0.5×SSC溶液煮沸15 min，用200μg/mL蛋白酶K在37℃、6~10 min条件下消化，可以取得较好的FISH效果；变性温度为81℃时检出率更高，DAPI复染浓度为1000 ng/mL时针对单色FISH较合适，而浓度为500、150 ng/mL时针对双色/多色FISH有较好的效果。结论：FISH条件经过对比得到优化，对石蜡组织FISH实验具有一定的指导意义。
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关键词
石蜡组织荧光原位杂交蛋白消化DNA变性DAPI染色fluorescence in situ hybridizationprotein digestDNA denaturationDAPI staining
医学主题词
石蜡(Paraffin)组织(Tissues)原位杂交, 荧光(In Situ Hybridization, Fluorescence)消化(Digestion)蛋白(Egg White)
分类号
Q503（生物化学一般性问题）
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2013.03.024
发布时间
2013-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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