换一批KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
Expression, Purification of Klebsiella pneumoniae Carbapenemase-2 and its Catalytic Kinetic of Antibiotics Hydrolysis
摘要目的：：表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶，并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法：将KPC-2基因与pET-22b（+）原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经FF镍柱纯化后，SDS-PAGE检测蛋白的纯度；用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果：构建了高效表达KPC-2的工程菌，得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白，该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素，其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强，最适温度约为40℃，最适pH值约为6.5。结论：为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。
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关键词
细菌耐药KPC-2型碳青霉烯酶β内酰胺类抗生素酶催化动力学antibiotic resistanceKlebsiella pneumoniae carbapenemase-2β-lactamaseenzyme kinetics
分类号
Q78
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2013.05.012
发布时间
2013-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金(81072677)（7122134）；
北京市自然科学基金
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