重组人BD3-BPI的内毒素中和活性及其在高盐环境中抗菌活性的稳定性
LPS Neutralization Activity and High-Salt Sensitivity of rhBD3-BPI
摘要目的:验证重组人BD3-BPI(rhBD3-BPI)是否具有内毒素中和活性,研究其在高盐环境中是否能保持抗菌活性。方法:根据内毒素标准品绘制内毒素活性标准曲线,将100μL梯度稀释的rhBD3-BPI与100μL 10 EU/mL脂多糖(LPS)混匀,37℃水浴60 min,同时设标准对照(只含10 EU/mL LPS的标准品溶液),并以无热源水作为空白对照,采用基质显色法进行鲎试验测定LPS的活性;将6×108 CFU/mL的革兰阳性和阴性标准菌株及临床分离的多药耐药菌株接种于含1 mg/mL rhBD3-BPI和0~250 mmol/L不同浓度NaCl的液体细菌培养基中,37℃培养3 h后用10 mmol/L磷酸钠按1∶1~1∶1000的比例稀释,铺LB培养基平板,37℃过夜培养,观察各平板菌落生长情况,计数并计算杀菌率。结果:在5 EU/mL的标准内毒素体系中,当rhBD3-BPI的浓度高于4μg/mL时即开始表现出一定的内毒素中和活性,当rhBD3-BPI的浓度分别为16、32μg/mL时,其内毒素中和率分别为23%和88%,随后rhBD3-BPI对内毒素的中和活性趋于平稳,50μg/mL的rhBD3-BPI对所有受检菌均表现出100%的杀伤效应。当NaCl浓度低于150 mmol/L时,rhBD3-BPI对各受检菌的杀菌活性均未受明显影响;NaCl浓度升高至150~200 mmol/L,rhBD3-BPI对各受检菌的杀菌活性有所下降,但其杀伤率仍在90%以上;当NaCl浓度高于200 mmol/L时,盐浓度对rhBD3-BPI杀菌活性的影响才较为明显,但即使NaCl浓度达到250 mmol/L,rhBD3-BPI的杀菌活性仍保持在85%以上。结论:rh-BD3-BPI具有内毒素中和活性,在高盐环境中具有良好的抗菌活性稳定性。
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