换一批摘要目的：建立质粒pVAX1-PENK的大规模制备工艺。方法：对大肠杆菌工程菌DH5α-pVAX1-PENK进行补料发酵，利用自行发明的连续碱裂解过程对菌体进行裂解，经超滤浓缩后，用Sepharose 6 Fast Flow层析柱分离DNA与RNA，再经Plasmidselect Xtra层析柱分离超螺旋质粒DNA与开环或线性质粒DNA，最后经Source 15Q层析柱精制质粒DNA。结果：发酵获得质粒pVAX1-PENK的产率为182 mg/L，经碱裂解及层析分离后，最终制备的质粒DNA超螺旋比例大于98%，总回收率为60.5%，纯度（D260nm/D280nm）为1.8~2.0。结论：建立的质粒DNA生产工艺可以制备大量高纯度的质粒DNA，并避免了使用动物源性的酶及有毒试剂。
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关键词
重组质粒pVAX1-PENK发酵连续碱裂解分离纯化recombinant plasmid pVAX1-PENKfermentationcontinuous alkaline lysispurification
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DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2013.06.018
发布时间
2014-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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