换一批
换一批用改进的重叠延伸PCR技术构建三位点突变载体
Construction of Three Point Mutations Vector by Modifying Overlap Extension PCR
摘要目的:改进传统重叠延伸PCR方法,实现引入3个不同DNA突变位点的简便的多位点定点突变.方法:根据前期构建的包含人线粒体12S rRNA(NC 01290)3个热点突变位点的野生型质粒序列,利用Muta Primer 2.0软件设计针对3个热点突变位点的3对互补的定点突变引物,以野生型质粒为模板,结合重叠延伸PCR反应和冷冻析出法,产生同时包含3个突变位点的突变目的片段,酶切后克隆到载体中,测序确证是否突变成功.结果:DNA测序证实3个不同突变位点同时成功引入,定点突变载体构建成功.结论:用改进的重叠延伸PCR技术能简便、高效地获得多位点定点突变载体,在分子生物学领域有较高的使用价值.
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关键词
重叠延伸PCR多位点突变定点突变冷冻析出overlap extension PCRmultisite mutationsite-directed mutagenesisfrozen precipitation
分类号
Q78
栏目名称
技术方法
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2014.02.023
发布时间
2014-06-10
基金项目
国家自然科学基金
南华大学博士启动基金
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