换一批表达猴免疫缺陷病毒Env蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选
Construction and Selection of the Recombinant Fowlpox Virus Expressing Env Protein of Simian Immunodeficiency Virus
摘要目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定.方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-SIV env,然后将其与FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR、RT-PCR、Western印迹对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析.结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组FPV基因组中,RT-PCR、Western印迹结果表明SIV Env蛋白在感染细胞内表达且具有抗原性;连续传代20次,PCR、RT-PCR、Western印迹均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,且病毒已经纯化.结论:获得表达SIV Env蛋白的重组FPV,为进一步免疫试验研究奠定了基础.
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关键词
重组鸡痘病毒Env蛋白猴免疫缺陷病毒遗传稳定性recombinant fowlpox virusEnv proteinsimian immunodeficiency virusgenetic stability
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2014.03.004
发布时间
2014-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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