血管内皮生长因子全长抗体在毕赤酵母中的表达与活性鉴定

Expression of VEGF Full Length Antibody in Pichia pastoris and its Activity Detection

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摘要目的：构建血管内皮生长因子（VEGF）全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL，评价其在毕赤酵母中的表达产物与抗原的结合特性，及其抑制细胞增殖的活性。方法：利用基因合成分别获得VEGF抗体CL和CH序列，分别构建pPICZαA-CH和pPICZαA-CL重组质粒，再利用同尾酶特性构建双启动子表达盒的重组pPICZαA-CH-CL载体，用Westen印迹对其进行表达鉴定后将VH和VL序列插入该载体，获得VEGF的全长抗体表达载体pPICZαA-VH-CH-VL-CL；通过膜筛和ELISA进行菌株筛选，并对VEGF抗体表达阳性菌株进行小量表达和纯化，采用CCK-8法对其抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的活性进行初步评价。结果：获得表达轻、重链的VEGF抗体表达载体， ELISA实验证明pPICZαA-VH-CH-VL-CL具有一定的VEGF抗原结合特性；体外增殖实验表明，该抗体可以以剂量依赖性抑制HUVEC增殖。结论：在毕赤酵母中表达、纯化了具有一定功能活性的VEGF全长抗体，为后续比较研究酵母糖基化改造对VEGF抗体的药效学和药代学的影响提供了基础。

作者陈薇 ^[1] 张晶 ^[2] 刘强 ^[3] 华玲 ^[3] 刘蕴慧 ^[3] 莫嫣娉 ^[4] 高新 ^[3] 付洁 ^[3] 宋海峰 ^[3] 学术成果认领

作者单位解放军医学院病理科,北京,100853 ^[1] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室，北京100850; 安徽医科大学研究生学院，安徽合肥 230032 ^[2] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室,北京,100850 ^[3] 解放军第309医院,北京,100091 ^[4]

关键词血管内皮生长因子毕赤酵母抗体肿瘤增殖 vascular endothelial growth factor Phchia pastoris human full-length antibody tumor inhibition

主题词抗体(Antibodies)毕赤酵母(Pichia)血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A)肿瘤(Neoplasms)抗原(Antigens)

分类号 Q78 R392.1

栏目名称 研究报告

DOI 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.04.12

发布时间 2014-09-06

基金项目

国家自然科学基金(81272701/H1617) 北京市自然科学基金