成纤维细胞生长因子受体3胞外配体结合区的重组表达及其与A型肉毒毒素重链C端的相互作用
Expression of FGFR3 Extracellular Ligand-Binding Region and its Interaction with C-Terminal of BoNT/A Heavy Chain
摘要目的:实现成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)胞外配体结合区FGFR3D23的表达与纯化,并鉴定其与A型肉毒毒素重链C端(BoNT/AHc)的相互作用。方法:全基因合成的FGFR3D23基因片段经酶切连入pTIG(+)质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG诱导表达,获得的包含体经Ni2+柱纯化,透析复性后通过pull-down及ELISA检测纯化蛋白与BoNT/AHc的相互作用。结果与结论:SDS-PAGE分析结果显示得到相对分子质量约27×103的蛋白特异表达条带,表达量为1.39 mg/L,包含体占73.4%;纯化和复性得到的目的蛋白纯度约96%,复性率约3%;pull-down及ELI?SA实验结果证明FGFR3D23可以与BoNT/AHc特异性地相互作用。
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