换一批
换一批利用荧光定量PCR分析c-Ha-ras基因在C57-ras转基因小鼠中的拷贝数
Copy Number Analysis of c-Ha-ras Gene in C57-ras Transgenic Mice by Real-Time Quantitative PCR
摘要目的：利用real-time PCR建立检测C57-ras转基因小鼠中外源c-Ha-ras基因拷贝数的简便方法，为药物安全性评价C57-ras转基因小鼠模型的繁殖和筛选提供数据支持。方法：以自建的人原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠为研究对象，利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的绝对定量法测定3个C57-ras转基因小鼠系的c-Ha-ras基因Ct值，通过与内参基因GAPDH比较计算获得转基因的拷贝数。结果：内参基因GAPDH的标准曲线为lgNGAPDH=-2.852Ct+26.236，外源基因c-Ha-ras的标准曲线为lgNRAS=-3.068Ct+39.186；经计算，NO.2、NO.3、NO.5系的F6代拷贝数分别为4、4和3，并且系内不同个体间拷贝数一致。结论：利用SYBR GreenⅠ real-time PCR技术建立了检测C57-ras转基因小鼠中外源基因拷贝数的方法，该方法操作简单，节约成本，为C57-ras致癌性模型的选留和应用提供了基础和技术手段，也为其他类似转基因品系中转基因拷贝数的确定提供了一种参考方法。
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关键词
C57-ras致癌性模型转基因c-Ha-ras实时荧光定量PCR拷贝数transgenic C57-ras carcinogenic modeltransgene c-Ha-rasreal-time quantitative PCRcopy num-ber
分类号
Q78
栏目名称
研究报告
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2015.02.017
发布时间
2015-05-20
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