换一批摘要目的:建立不通过克隆步骤高通量表达来源于人单个B细胞的抗体轻、重链基因的方法.方法和结果:PCR扩增3个末端重叠的DNA片段,即(①CMV启动子和编码抗体引导区序列的片段;②抗体IgG1重链恒定区序列和牛生长激素(BGH)poly(A)信号序列,轻链Igκ恒定区序列和BGH poly(A)信号序列,轻链Igλ恒定区序列和BGH poly(A)信号序列;以及③抗体基因可变区序列VH、Vκ或Vλ.3个片段通过重叠延伸PCR构建全长线性片段即线性表达框,将此来源于人单个B细胞的配对的抗体轻、重链线性表达框共转染293E细胞,72 h收集上清检测到表达的抗体.结论:构建的抗体基因线性表达框是无须克隆,快速高通量表达抗体基因进行筛选分析的策略.
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关键词
单克隆抗体单个B细胞抗体基因重叠延伸PCR线性表达框monoclonal antibodysingle B cellsimmunoglobulin geneoverlapping PCRlinear gene expression cassette
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DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2016.02.003
发布时间
2016-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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