换一批
换一批H7N9流感假病毒制备条件的优化及其在中和抗体检测中的初步应用
Optimization of the Package Condition for H7N9 Influenza Pseudovirus and its Utilization in Neutralization Assay
摘要目的:优化A/Anhui/1/2013 (H7N9)流感假病毒的制备条件.方法:采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,通过对质粒组合方式、骨架质粒与包膜质粒配比、质粒复合物与转染试剂配比、换液时间点、维持液血清浓度、假病毒收获时间点等条件的探索,优化H7N9假病毒的包装条件;通过对4种假病毒纯化方案的比较,确定纯化方法;对纯化的假病毒进行Western印迹鉴定和电镜形态观察,了解其生物学特征;通过中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果:假病毒包装条件优化结果表明,以血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)作为膜质粒,采用骨架质粒与膜质粒质量比3:1、质粒复合物与转染试剂质量体积比1:2混合,转染293FT细胞后10 h换含2％胎牛血清的维持液,培养48 h后收获上清,可高效获得流感假病毒AHop-H7N9pp;不同纯化方式获得的假病毒对感染H7N9的雪貂血清的中和抗体检测结果表明,假病毒纯化方法对中和抗体检测灵敏度的影响没有显著性差异;生物学特征分析显示,纯化的假病毒在电镜下具有典型的流感病毒形态,Western印迹能检测到HA和P24蛋白;多种流感疫苗小鼠血清中和试验结果表明该假病毒具有高度特异性,可用于H7N9中和抗体检测.结论:获得了包装有A/Anhui/1/2013 (H7N9)HA与NA的假病毒,并确定了高效制备H7N9假病毒的各条件参数,为基于H7N9流感假病毒的中和抗体检测平台的建立奠定了基础.
更多相关知识
关键词
慢病毒载体包装系统H7N9流感病毒假病毒中和试验lentiviral vector packaging systemsH7N9 influenza viruspseudovirusneutralization
主题词
抗体, 中和(Antibodies, Neutralizing)质粒(Plasmids)中和试验(Neutralization Tests)病毒(Viruses)正黏病毒科(Orthomyxoviridae)
栏目名称
研究报告
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2016.03.011
发布时间
2016-07-21
基金项目
“十二五”国家科技重大专项
国家高技术研究发展计划
国家自然科学基金
- 浏览161
- 被引2
- 下载28
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
