换一批用SDSL-EPR技术测量LSECtin-CRD与甘露糖结合过程中的位点运动性变化
Mobility Analysis of Residue Sites in LSECtin-CRD After Binding with Mannose Using SDSL-EPR
摘要目的:应用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)的糖基识别结构域CRD上不同位点氨基酸的运动特性及其与甘露耱结合过程中的构象变化.方法:通过SOE-PCR方法对LSECtin-CRD引入半胱氨酸点突变,构建pET28b-Tat-LSECtin-CRD载体,可溶性表达LSECtin-CRD突变体蛋白;对突变位点进行自旋标记;EPR检测标记后样品的EPR波谱;用SS-FDDM软件对EPR波谱进行模拟和解析,获得旋转相关时间τc,研究其构象特点及变化.结果:在CRD的Ca2+结合位点和配体结合功能区构建了5个突变体蛋白;LSECtin-CRD与Ca2+和甘露糖结合后,4个位点的τc值明显升高,表明CRD结构域整体运动性降低;5个突变位点运动性差异较大,其中A258位点运动性变化最大,可能是参与糖基结合的关键位点.结论:SDSL-EPR技术能够有效研究LSECtin-CRD参与糖基结合过程中的构象运动性,研究结果证明了LSECtin-CRD在与糖基结合后整体运动性受限.
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关键词
定点自旋标记-电子顺磁共振技术(SDSL-EPR)肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)糖基识别结构域(CRD)运动性site directed spin labeling electron paramagnetic resonance(SDSL-EPR)liver and lymph node sinusoidal endothelial cell C-type lectin(LSECtin)carbohydrate recognition domain(CRD)mobility
医学主题词
性(Sex)甘露糖(Mannose)电子自旋共振谱学(Electron Spin Resonance Spectroscopy)淋巴结(Lymph Nodes)内皮细胞(Endothelial Cells)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2016.03.018
发布时间
2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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