换一批
换一批2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶基因的克隆表达及酶活性测定
Gene Cloning, Expression and Identification of the N-Acetylglucosamine-6-Phosphate Deacetylase of Streptococcus suis serotype 2
摘要目的:克隆表达2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶(NagA)的编码基因,并测定其酶活性.方法:根据GenBank中05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增NagA (SSU05_1259)基因,将其克隆到pET28a载体中,构建重组质粒pET28a:NagA,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE与质谱鉴定;利用Ni亲和层析柱对表达产物进行纯化,获得NagA重组蛋白后测定其酶活性.结果:在大肠杆菌中高效表达了NagA基因,重组表达的NagA相对分子质量约为43×103,其酶促反应最适温度为37℃,最佳反应时间为30 min,最适反应pH值为7.5,最佳底物浓度为13 mmol/L.2型猪链球菌NagA的体外酶活为124 U/mL,酶比活为78 U/mg.结论:在原核系统中表达了NagA基因,获得的NagA蛋白具有良好的酶学活性.
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关键词
2型猪链球菌N-乙酰氨基葡糖-6-磷酸脱乙酰酶原核表达酶活性Streptococcus suis seroptype 2N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylaseprokaryotic expressionenzymatic activity
分类号
Q78
栏目名称
研究报告
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2017.02.001
发布时间
2017-06-21
基金项目
国家自然科学基金
江苏省自然科学青年基金
南京军区军事医学科技创新课题
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