换一批遗传密码子扩充系统表达载体及其稳定细胞系的构建
Construction of Genetic Codon Expansion Expression Vector and Stably Transfected Cells
摘要目的:构建异源表达遗传密码子扩充系统的HeLa细胞系.方法:用PCR方法扩增MmBocRS、PyltRNA基因,定向克隆到Lenti-EF1α-Puro载体中,构建Lenti-EF1α-BocRS、Lenti-PyltRNA表达质粒;在HEK293T细胞中进行病毒包装,用获得的慢病毒感染HeLa细胞,获得BocRS-tRNACUA稳定细胞株;分别应用实时定量PCR和Western印迹鉴定该稳定细胞系中MmBocRS和PyltRNA的表达;利用转染EGFP的琥珀突变体验证BocRS-tRNACUA稳定细胞株的功能.结果:酶切及测序表明Lenti-EF1 α-BocRS和Lenti-PyltRNA质粒构建正确;实时定量PCR结果显示BocRS-tRNACUA稳定细胞株中PyltRNA的表达量显著提高;Western印迹结果显示BocRS-tRNACUA稳定细胞株中MmBocRS基因的表达量明显高于空白对照;转染EGFP琥珀突变体结果表明,可以通过非天然氨基酸来控制EGFP的表达.结论:构建了能稳定表达MmBocRS和PyltRNA的BocRS-tRNACUA细胞株,并实现了通过非天然氨基酸控制蛋白表达,为研究定点插入非天然氨基酸提供了细胞模型.
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关键词
遗传密码子扩充非天然氨基酸慢病毒载体稳定细胞株genetic codon expansionunnatural amino acidslentivirus vectorstably transfected cells
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2017.04.002
发布时间
2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
两用生物技术威胁评估（2016YFC1202400）
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