换一批Cre-loxP重组酶技术敲除酿酒酵母丙酮酸脱羧酶编码基因pdc1和pdc5
Cre-loxP Recombinase Technology Knocks out Saccharomy?ces cerevisiae Pyruvate Decarboxylase Encoding Genes pdc1 and pdc5
摘要目的:分别构建含有酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因pdc1和pdc5同源序列loxP-kanMX-loxP的质粒,敲除丙酮酸脱羧酶基因.方法:以两端含40 bp pdc1或pdc5的同源序列为引物,以pUG6质粒DNA为模板,通过PCR扩增loxP-kanMX-loxP基因敲除片段,将其分别插入pMD18-T、pEASY-T3,构建表达载体pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5并测序,构建后的质粒利用醋酸锂转化法转化酿酒酵母H5,经筛选鉴定后进行摇瓶发酵试验.结果:分别含有1693、1672 bp目的片段pdc1-loxP-kanMX、pdc5-loxP-kanMX的质粒pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5构建成功,发酵试验显示重组酿酒酵母H5-01与H5-02较原始菌株的乙醇产量分别下降了14.53％与17.54％,证明pdc1或pdc5基因被敲除.结论:利用Cre-loxP重组酶技术分别敲除了酿酒酵母pdc1和pdc5基因,为后续在酿酒酵母中连续敲除pdc1和pdc5奠定了良好的技术基础.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2019.04.004
发布时间
2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31570492）
黑龙江省教育厅重点项目（HDJCCX-2016Z05）
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