换一批
换一批固化金属离子亲和层析富集磷酸化多肽方法的选择及优化
Method for selection and optimization of phosphopeptide enrichment by immobilized-metal ion affinity chromatography
摘要在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME-IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non-MEIMAC).要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴定,就必须对富集方法进行选择和优化.利用基质辅助激光解析离子化串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对两种方法富集的磷酸化多肽进行了比较研究.结果表明,ME-IMAC方法容易发生样品丢失,质谱结果的分析也比较复杂,而Non-ME-IMAC方法则不仅操作简单而且富集效果理想.另外,优化了Non-ME-IMAC方法的实验条件,指出最佳的结合溶液是8%ACN/0.3%TFA,最佳的洗脱溶液是0.1mol/L EDTA(pH值8.0),从而建立了一套完整而简单有效的磷酸化多肽富集方法.
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关键词
磷酸化多肽甲酯化反应固化的金属离子亲和层析质谱phosphopeptidemethyl esterificationimmobilized-metal-ion affinity chromatographymass spectrometry
分类号
Q331
栏目名称
研究报告
DOI
10.3969/j.issn.1008-9632.2010.01.001
发布时间
2010-04-20
基金项目
国家自然科学基金
国家重点基础研究项目特别基金
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