换一批日本蟳高血糖激素基因的克隆与表达分析
Cloning and expression analysis of crustacean hyperglycemic hormone (CHH) in Charybdis japonica
摘要通过RACE技术克隆获得日本蟳Charybdis japonica 高血糖激素基因（ CjCHH）全长cDNA序列；运用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）方法分析该基因的组织差异性表达；利用原核表达技术获得CjCHH重组蛋白。序列分析表明：CjCHH cDNA全长1754 bp，包含111bp的5’末端非编码区（UTR），423 bp的开放阅读框（ORF），以及1236 bp的3’UTR，该基因可编码140个氨基酸。序列比对结果显示：CjCHH的成熟肽序列与其它甲壳动物CHH的一致性为41％～88％。系统进化树显示：CjCHH与其它梭子蟹科的CHH聚在一起，这与日本蟳所处的分类地位一致。组织差异性表达研究显示：CjCHH在检测的10个组织中均有表达，其中眼柄中表达量最高，肠和Y-器次之，其余组织表达量较低。成功构建了CjCHH重组表达质粒pET-CHH，并在大肠杆菌（ Escherichia coli）中获得了高效表达，重组蛋白的相对分子量约11 kDa，与预测的相对分子质量大小相一致，表达水平在5 h的IPTG诱导过程中呈现上升趋势。
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关键词
日本蟳高血糖激素cDNA克隆组织表达原核表达Charybdis japonicacrustacean hyperglycemic hormone ( CHH)cDNA cloningtissue distributionprokaryotic expres-sion
分类号
S917.4
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2014.04.010
发布时间
2014-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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