换一批N端9个谷氨酸或7个天冬氨酸显著增强普鲁兰酶在大肠杆菌中表达分泌
N-terminal 9-glutamine and 7-aspartate tags significantly increase the expression and secretion of pullulanase from Bacillus acidopullulyticus in Escherichia coli
摘要各种标签被广泛应用于大肠杆菌分泌表达异源蛋白,其中最简单有效地便是氨基酸标签,尤其是带电荷氨基酸标签.为了研究N端添加不同种类和数目的带电荷氨基酸标签对普鲁兰酶(pullulanase,BaPul13A)在大肠杆菌中表达分泌水平的影响,构建了25株BaPul13A变体.实验结果表明:N端添加9个连续的谷氨酸标签,降低了mRNA的转录水平,增加了N端mRNA的稳定性,使得普鲁兰酶总酶活达到179.60 U/mL,比不添加氨基酸标签的对照菌高278.28%.N端添加7个连续的天冬氨酸标签,增强了大肠杆菌细胞内膜通透性,大量的普鲁兰酶,48.18 U/mL,分泌到培养基中.通过蛋白质结构预测软件I-TASSER分析得知,N端添加不同带电荷氨基酸标签引起CBM41结构域发生变化,猜测该变化是导致BaPul13A变体表达分泌水平差异的主要原因.
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关键词
带电荷氨基酸标签表达分泌mRNA膜通透性蛋白结构预测charged-amino-acid tagsexpression and secretorymRNAmembrane permeabilityprotein structure prediction
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2017.03.011
发布时间
2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中央高校基本科研业务费专项（JUSRP51401A）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2015AA020802）
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2013CB733602）
国家自然科学基金（31570034）
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