换一批摘要建立一种有效提高重组 5 型腺相关病毒(rAAV5)实心载体比率的阴离子交换层析的纯化方法.对亲和层析捕获的rAAV5 样品,使用多种阴离子交换层析柱进行离子强度线性梯度洗脱,CIMmultus QA(CIMQ)层析柱能够有效分离不含目的基因组的病毒(病毒空颗粒)和含目的基因组的病毒(实心载体).基于CIMQ层析柱,进行纯化缓冲液体系、紫外目标峰收集范围的优化.通过qPCR检测病毒基因组(Vg)含量计算回收率,高效液相色谱法(HPLC)或体积排阻色谱-多角度静态光散射技术(SEC-MALS)测定实心载体比率.使用Tris,Na2 HPO4,pH 8.0 缓冲体系,洗脱时收集紫外吸收值UV260/UV280 比值大于 1 的部分,收集的样品实心载体比率达到 80.3%.成功建立一种简单方便的阴离子交换层析方法,能去除rAAV5 样品中的病毒空颗粒,使实心载体比率达到基因治疗临床产品要求.
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关键词
rAAV5阴离子交换层析实心载体比率回收率纯化rAAV5anion exchange chromatographyvector capsids proportionrecoverypurification
分类号
TQ425
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2023.04.107
发布时间
2023-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
天津市自然科学基金（No.18JCQNJC09700）
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