换一批摘要为构建稳定表达人源TLR2 分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2 和TLR6 的基因分别克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经 293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞(TLR2-),嘌呤霉素筛选获得稳定表达TLR2 分子的Nalm-6细胞(TLR2+).利用倒置荧光显微镜观察细胞状态和绿色荧光表达情况,通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测相关蛋白表达水平,采用CCK-8 以及流式细胞术检测细胞存活率和细胞增殖水平.结果显示:倒置荧光显微镜下可见成功转染慢病毒的Nalm-6细胞表达绿色荧光和嘌呤霉素抗性.Western Blot检测到TLR2 在Nalm-6 细胞中成功表达,且TLR2 信号的激活明显增强PI3K-AKT信号轴分子的磷酸化水平.CCK-8和流式细胞术发现TLR2活化可提升细胞存活率,促进细胞增殖.研究成功构建了过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型,并在此基础上验证TLR2活化不仅能够增强B细胞PI3K-AKT信号通路传导,还可促进细胞增殖.此模型为进一步探究TLR2通路对B细胞抗感染免疫功能的影响奠定基础.
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关键词
TLR2慢病毒载体B淋巴细胞PI3K-AKT信号通路细胞增殖TLR2lentiviral vectorB lymphocytePI3K-AKT pathwaycell proliferation
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2024.04.024
发布时间
2024-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
湖北省教育厅科学研究计划指导性项目（B2021115）
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