换一批
换一批重组蔗糖异构酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化
Expression and fermentation optimization of recombinant sucrose isomerase in Bacillus subtilis
摘要通过启动子及培养基优化策略构建非诱导型启动子调控的高表达水平蔗糖异构酶,探究不同启动子对重组菌株Bacillus subtilis SCK6 表达蔗糖异构酶的影响,通过无限制克隆法分别构建 6 个非诱导型单启动子PHpalⅠ、P43、PgsiB、PsrfA、PamyQ、PaprE 和 3 个双启动子P43-PgsiB、2P43、2PgsiB调控的蔗糖异构酶重组菌株,结果显示,2P43 调控下蔗糖异构酶酶活力最高,为(19.08±0.09)U/mL,是原始启动子Pgrac 调控下酶活力的 1.37 倍.利用培养基优化,进一步提高蔗糖异构酶表达水平.通过单因素法从碳源、氮源和无机盐等 3 个方面对 2P43 调控的重组菌株的发酵培养基进行优化,最优发酵培养基配方为 25 g/L甘油、30 g/L酵母浸粉、20.75 g/L大豆蛋白胨,PalⅠ酶活力提高至(80.36±9.32)U/mL,是原始培养基(19.08±0.09)U/mL 的 4.2 倍.实验成功构建高产物活力的双启动子调控Bacillus subtilis蔗糖异构酶表达系统,为后续研究及生产食品可用的蔗糖异构酶奠定理论基础,并为工业生产和应用异麦芽酮糖提供理论依据.
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关键词
蔗糖异构酶启动子枯草芽孢杆菌培养基优化全面实验sucrose isomeraseinitiator projectBacillus subtilismedium optimizationfull-scale experiment
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2024.06.039
发布时间
2024-12-24
基金项目
国家自然科学基金（31771907）
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