换一批摘要借助多色熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感染情况.同时添加辣椒基因组作为内参,排除假阴性干扰,使结果更准确可靠.通过对探针进行设计,使不同病原菌在不同荧光通道的不同的Tm值处出现熔解峰:在FAM荧光通道,金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的熔解峰Tm值分别为(53.51±0.94)℃、(61.23±0.34)℃;在ROX通道,铜绿假单胞菌和嗜肺巴斯德杆菌的熔解峰Tm值分别为(61.70±0.66)℃、(55.98±0.10)℃;在CY5通道,变形杆菌和辣椒内参的熔解峰Tm值分别为(63.91±0.19)℃、(57.43±0.31)℃.经验证,该方法对不同病原体具有不同的检测限,分别为金黄色葡萄球菌102 copies/μL、肺炎克雷伯菌101 copies/μL、铜绿假单胞菌102 copies/μL、嗜肺巴斯德杆菌102 copies/μL、变形杆菌102 copies/μL.综上,研究建立的多色熔解曲线方法能够对多种小鼠常见病原体在单管内进行快速有效的检测.
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关键词
多色熔解曲线分析多重PCR小鼠病原体分子检测快速检测multicolor melting curve analysismultiple PCRmouse pathogensmolecular detectionrapid detection
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2025.02.107
发布时间
2025-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2018YFA0801101）
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