换一批基于关键酶和底盘菌株筛选的色氨酸高产菌株构建
Construction of tryptophan overproducers via key enzyme and chassis strain selection
摘要为了快速构建色氨酸高产菌株,分别对色氨酸生产途径关键酶及底盘菌株进行高通量筛选.通过优化摇菌管发酵体系,使其产量与摇瓶发酵产量保持了较高一致性.利用色氨酸与盐酸萘乙二胺的显色反应,建立了适配摇菌管发酵水平的色氨酸定量检测方法,检测范围为50～1 000 mg/L.利用该方法,从转酮醇酶TktA的随机突变库中分离出优势突变体TktA2.与野生型TktA相比,TktA2具有更紧凑的二聚体结构和更大的底物结合口袋,这些结构变化有助于提高酶的稳定性和底物进出速度.同时,从MG1655基因组简化菌株库中分离出优势底盘菌株T51,在T51中过表达TktA2后,获得了色氨酸高产菌株T51A2ΔtrpRΔtnaB,3 L发酵罐中色氨酸产量达31.37 g/L,相较出发菌株提高80.49％,糖酸转化率达19.01％.利用色氨酸快检方法,在摇菌管水平实现了色氨酸合成关键酶和底盘菌株的低成本高效筛选,优势整合后的色氨酸生产菌株在发酵规模放大后仍可复现其高产性能,为色氨酸高产菌株的开发奠定了基础.
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关键词
色氨酸高产菌株摇菌管发酵底盘筛选酶筛选色氨酸比色法tryptophan overproducerstube fermentationchassis screeningenzyme screeningtryptophan-colorimetric method
分类号
Q819（生物工程应用）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2025.05.031
发布时间
2025-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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