换一批基于Cre/loxP系统构建酿酒酵母YVC1基因缺失菌株
Construction of YVC1 gene deleted Saccharomyces cerevisiae based on Cre/loxP system
摘要酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)液泡膜上的钙离子通道Yvc1是调控细胞内Ca2+浓度的重要途径之一,Ca2+作为第二信使,可以提高酿酒酵母生产乙醇能力.因此,构建YVC1基因缺失菌株,为后期钙通道功能研究奠定基础.通过PCR技术,验证酿酒酵母DL5168中YVC1基因的存在.通过齐-尼二氏染色法和基因组特异性PCR,鉴定DL5168菌株染色体倍性.基于Cre/loxP系统原理,构建YVC1基因敲除组件,并通过醋酸锂转化法将其转至DL5168菌株中,通过含有100 μg/mL G418的YPD培养基筛选出阳性重组子.将pSH65质粒转入阳性重组子,用于切除抗性基因KanMX.结果表明,酿酒酵母DL5168基因组中具有液泡电导1基因YVC1.DL5168菌株为aα型二倍体.敲除组件pUG6-YVCl-loxP-KanMX成功与DL5168菌株发生同源重组,筛选到阳性重组子.pSH65质粒在半乳糖的诱导下产生Cre重组酶,成功切除重组子中的抗性基因KanMX,获得YVC1 一条等位基因缺失菌株DL5168-yvc1Δ.相同方法敲除另一条同源染色体上的等位基因.最终研究成功获得YVC1基因双倍体缺失菌株DL5168-yvc1Δ/Δ.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2025.05.060
发布时间
2025-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（21476032）
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