换一批土壤细菌16S rRNA基因实时荧光定量PCR标准品的制备及稳定性探究
Preparation and stability of real-time fluorescent quantitative PCR standards for soil bacteria 16S rRNA genes
摘要实时荧光定量PCR(qPCR)被越来越多地用于测量微生物的绝对数量,使用该方法的关键是制备合适的标准品并建立稳定的实验方案.本研究成功构建了一个含有土壤细菌 16S rRNA基因全长的质粒标准品,该标准品可以被 4 对细菌 16S rRNA基因的通用引物扩增.使用其中 2 对引物进行绝对定量qPCR实验,熔解曲线均为单峰,标准曲线的扩增效率分别为 87.4%和71.9%,拟合优度均大于0.99.1 d内使用同一套梯度稀释的标准品进行3次qPCR实验,使用TE或TE0.1 缓冲液进行稀释或 4℃低温存放均能提高标准曲线扩增效率和拟合优度的稳定性.质粒标准品-20℃存放 30 d后,标准曲线的扩增效率和拟合优度并未显著降低,但在不同时间测得的扩增效率有波动,使用TE或TE0.1 缓冲液进行标准品稀释可减小这种波动.保证标准品在存放和使用过程中的稳定性,有助于提高不同空间和时间进行绝对定量qPCR实验的准确性和复现性.
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关键词
绝对定量qPCR质粒克隆标准曲线扩增效率拟合优度absolute quantitative qPCRplasmid cloningstandard curveamplification efficiencygoodness of fit
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1736.2026.01.097
发布时间
2026-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京师范大学教学建设与改革项目（24-19-30）
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