换一批结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因原核表达载体的构建及表达
Construction and Expression of the Prokaryotic Expression vector of MTB cfp10-esat6 Fusion Gene
摘要构建结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白CFP10-ESAT6.用基因拼接(GeneSOEing)法扩增cfp10-esat6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGcfp10-esat6.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside,异丙基硫代-β -D半乳糖苷)诱导表达约42kDa带谷胱苷肽硫转移酶(Glutathione-S-Transferases GST)蛋白标签的rCFP10-ESAT6融合蛋白,经谷胱苷肽硫转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定.重组质粒pGcfp10-esat6中目的基因测序结果与报道序列相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Western印迹结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.本研究成功构建了原核表达载体pGcfp10-esat6,获得了rCFP10-ESAT6融合蛋白,为rCFP10-ESAT6融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.
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分类号
R3（基础医学）
栏目名称
DOI
10.3321/j.issn:1001-5515.2007.03.036
发布时间
2007-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（39870656）
四川省学术与技术带头人培养项目（4200316）
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