换一批
换一批Real-time PCR检测风疹病毒方法学建立及临床应用
Development and Clinical Trial of Fluorescence Real Time PCR to Detect Rubella Virus
摘要为了建立一种能广泛应用于临床快速、简便、灵敏度和特异性较好的风疹病毒(RV)定量诊断方法.针对RV基因保守序列设计两对引物和一条荧光双标记探针.将PCR扩增所得到的产物片段克隆,作为定量检测的标准品, 进行Real-time PCR检测,绘制标准曲线.将此方法和ELISA试剂盒平行检测50份孕妇血清,评估两种方法检出阳性率的差异显著性.Real-time PCR法能较好地检出RV cDNA载量.曲线的相关系数(r)为0.998,可检测线性范围大约在103～109 copies/μl,灵敏度接近103 copies/μl;批间、批内CV值分别为3.36%、0.94%;也有较好的特异性.与经典的ELISA方法相比,有显著性差异.Real-time PCR方法操作简单、快速,并能避免PCR后处理导致的假阳性污染,实现实时定量.此方法对RV感染的临床诊断和疗效判断等方面有较大的指导意义.
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