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siRNA对卵巢癌细胞周期及EGFR表达的影响

Influence of siRNA on the ovarian carcinoma cell cycle and EGFR expression

摘要目的 体外构建编码人类表皮生长因子受体(EGFR)的小干扰RNA(siRNA)的质粒表达载体,观察其对卵巢癌Skov-3细胞EGFR的特异性抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响.方法 构建pSilencer-EGFR siRNA真核基因表达载体.采用脂质体介导的方法将其转染到卵巢痛细胞株Skov-3,实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌Skov-3细胞)、非特异性转染组(转染非特异性质粒载体)及特异性转染组.用RT-PCR的方法检测mRNA水平的变化,用免疫荧光法检测EGFR蛋白水平的变化,流式细胞仪检测其对卵巢癌细胞周期及凋亡的影响.结果 成功构建pSilencer-EGFRsiRNA真核基因表达载体.psiRNA-EGFR质粒明显下调Skov一3细胞中EGFR的表达,阻断细胞周期在G,期,促进细胞凋亡.结论 重组质粒psiRNA-EGFR能有效地抑制Skov-3细胞内EGFR的表达、抑制细胞增殖,其抑制机制可能与引起细胞周期再分布、降低S期细胞比例和促进细胞凋亡有关.

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