摘要目的 探讨雷帕霉素与Torin2对人γδT细胞体外培养增殖和细胞毒活性的影响及相关机制.方法 选择10例健康志愿者,其中男性5例,女性5例;平均年龄68.0岁(标准差4.7岁).选择人慢性淋巴细胞白血病(CLL)肿瘤细胞株MEC-1.从志愿者外周静脉血获得外周血单个核细胞(PBMC),经处理获得γδT细胞.体外增殖培养的人γδT细胞在第10天观察细胞形态特征,流式细胞术检测人γδT细胞百分率.γδT细胞分别用100nmol/L雷帕霉素(雷帕霉素组)和Troin2处理(Troin2组),同时用RPMI 1640培养液作为空白对照(对照组),分别培养24、48 h,计算活细胞数.采用不同效靶比(1∶1、3∶1、9∶1、18∶1、36∶1),乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测人γδT细胞对MEC-1细胞的杀伤作用.流式细胞术检测各组白细胞介素(IL)-17的表达.Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、起始因子4E结合蛋白1(4EBP-1)的表达.结果 扩增前人γδT细胞百分含量为4.70％±1.17％,经10 d扩增且纯化后γδT细胞百分含量为94.20％±2.18％.雷帕霉素组24 h扩增倍数为1.45±0.20,48 h扩增倍数为2.71±0.06,与对照组间差异无统计学意义(P＞0.05);Torin2组24 h扩增倍数为1.14±0.05,48 h扩增倍数为2.09±0.06,均显著低于雷帕霉素组及对照组(P＜0.05).雷帕霉素组γδT细胞的杀伤活性分别为 0.05％±0.01％(1∶1)、10.84％±0.88％(3∶1)、23.02％±0.65％(9∶1)、50.74％±2.96％(18∶1)、77.75％±0.55％(36∶1),均显著高于对照组(P＜0.05);Torin2组γδT细胞的杀伤活性分别为0.06％±0.01％(1∶1)、4.06％±0.84％(3∶1)、10.72％±2.97％(9∶1)、18.20％±2.83％(18∶1)、36.18％±2.19％(36∶1),均低于雷帕霉素组及对照组(P＜0.05).雷帕霉素组IL-17表达为(32.7±1.7)％,Troin2组IL-17表达为(12.2±1.4)％,均显著低于对照组(73.1±2.7)％(均P＜0.05).且Troin2组抑制γδT分泌IL-17程度更明显,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,与对照组相比,雷帕霉素组、Troin2组mTOR表达水平均下降,差异有统计学意义(t 雷帕霉素组=14.23,P＜0.05;tTroin2组=11.67,P＜0.05);雷帕霉素组、Troin2组p-mTOR表达水平均下降,差异有统计学意义(t雷帕霉素组=16.78,P＜0.05;tTroin2组=25.31,P＜0.05);雷帕霉素组PI3K表达提高,差异有统计学意义(t=18.77,P＜0.05);AKT表达提高,差异有统计学意义(t=22.21,P＜0.05);p-AKT表达提高,差异有统计学意义(=19.33,P＜0.05);4EBP-1表达提高,差异有统计学意义(t=14.37,P＜0.05).结论 雷帕霉素能在不影响体外人γδT细胞增殖的基础上,增强人γδT细胞对MEC-1细胞的肿瘤杀伤活性并抑制其IL-17的水平,其机制可能与mTOR C1/C2位点之间的负反馈机制相关.