乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达

Clone and prokaryotic expression of breast cancer related molecule human mammaglobin gene

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摘要[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法.[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序,用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达结果.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符.对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致.在IPTG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34 kD的产物.[结论]重组表达质粒pQE40-hMAM表达成功.

作者刘秀娜 ^[1] 王仙园 ^[1] 周娟 ^[1] 赵力军 ^[2] 潘自铁 ^[1] 胡川闽 ^[1] 学术成果认领

作者单位 400038,中国人民解放军第三军医大学 ^[1] National Center for HIV,STD and TB Prevention,Centers for Disease Control and Prevention.1600 Clifton Road,Atalanta,GA30333,USA ^[2]

关键词人乳腺珠蛋白乳腺癌基因克隆基因表达

主题词乳腺肿瘤(Breast Neoplasms)基因(Genes)乳腺, 人(Mammary Glands, Human)珠蛋白类(Globins)基因表达(Gene Expression)

分类号 R471

栏目名称论著

DOI 10.3969/j.issn.1009-6493.2006.01.009

发布时间 2006-03-16

基金项目

重庆市科委科研项目 第三军医大学校科研和教改项目