换一批
换一批摘要目的 建立改良的重力沉降法从小鼠曲细精管内分离高纯度的各类型生精细胞,并对该方法的可行性进行分析.方法 采用酶消化法制备生精细胞悬液,利用重力沉降法分离生精细胞;并应用组织学方法和半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)对各类型生精细胞的形态学特征和分离后的纯度进行鉴定.结果 依次从6 d、9 d、14 d、21 d及35 d龄小鼠曲细精管内分离获得原始A型精原细胞、B型精原细胞、前细线期精母细胞、粗线期精母细胞及圆形精子细胞,纯度分别为0.94,0.86,0.88,0.92和0.96.半定量RT-PCR分析表明6个公认的生精细胞特异性分子标志及精子发生特异性表达基因有着显著的阶段特异性表达特征,说明分离获得的各类型生精细胞具有高度的同一性及纯度.结论 采用该方法分离得到的生精细胞可以满足进一步研究的需要,为阐明精子发生的分子机制奠定了方法学的基础.
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