换一批
换一批SCN5A基因L812Q突变体细胞模型的建立与细胞定位
Construction of cell model of the SCN5A gene-L812Q mutation and its celluar localization
摘要目的 建立SCN5A基因L812Q突变体细胞模型,并细胞定位. 方法 应用重叠PCR的方法构建SCN5A基因L812Q突变;以pMD19-T载体克隆SCN5A基因L812Q突变体;SCN5A-L812Q通过EcoR Ⅰ和ACC Ⅰ限制性内切酶位点插入表达载体质粒pEGFP-C1-hH1中,测序鉴定;将构建好的pEGFP-C1-hH1-L812Q突变型质粒、pEGFP-C1-hH1野生型质粒瞬时转染进入HEK293细胞,通过免疫荧光检测L812Q突变的细胞定位;将pEGFP-C1-hH1、pEGFP-C1-hH1-L812Q和pEGFP-C1-hH+ pEGFP-C1-hH1-L812Q分别转染进入HEK293细胞,用Western blot方法分析L812Q突变体的表达. 结果 测序结果显示pEGFP-C1-hH1-L812Q表达载体构建成功.荧光检测验证,野生型SCN5A主要定位在细胞膜上,而突变型定位在细胞质中.通过Western blot分析发现,突变型通道蛋白在细胞质中的表达量高于野生型. 结论 本研究成功构建了SCN5A基因突变载体pEGFP-C1-hH1-L812Q,证明SCN5A基因L812Q突变型主要定位在细胞质中.
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分类号
R596.1
栏目名称
基础医学
DOI
10.13753/j.issn.1007-6611.2016.07.001
发布时间
2016-09-08
基金项目
国家自然科学基金-中加合作项目
西安交通大学生物医学共享平台建设资助项目
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