换一批mIDH1真核表达载体的构建及其对U87细胞增殖的影响
Construction of mIDH1 eukaryotic expression vector and its effect on proliferation of U87 cells
摘要目的 构建人mIDH1基因的真核表达载体及U87稳转细胞系,观察mIDH1对胶质瘤U87细胞体内外增殖的影响.方法 以IDHI-cDNA为模板,采用PCR方法扩增IDH1片段,IDH1片段经双酶切、连接重组至真核表达载体p-EGFP-C1,构建IDH1野生型(wIDH1)重组质粒,利用点突变技术通过IDH1真核表达载体构建突变型IDH1(mIDH1)真核表达载体,并通过双酶切产物明胶电泳及DNA测序鉴定该重组质粒.Lip2000脂质体介导突变型IDH1转染U87胶质瘤细胞,利用G418筛选构建稳定转染p-EGFP-mIDH1真核表达载体的单克隆细胞株,构建稳转细胞系,CCK-8法检测U87细胞体外增殖能力,裸鼠成瘤实验检测mIDH1细胞系与对照U87细胞系的体内增殖. 结果 mIDH1重组质粒经双酶切及测序鉴定证明mIDH1重组质粒构建成功,顺利转染U87胶质瘤细胞并高效表达,体外可抑制胶质瘤细胞的增殖,体内可减缓裸鼠皮下成瘤速度.结论 p-EGFP-mIDH1真核表达载体可在U87胶质瘤细胞系中稳定表达,并可抑制胶质瘤细胞的增殖.
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关键词
真核表达载体胶质瘤U87细胞IDH1基因稳转细胞系细胞增殖eukaryotic expression vectorgliomaU87 cellsIDH1 genestable expression cell lineproliferation
分类号
R739.4（神经系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.13753/j.issn.1007-6611.2017.09.010
发布时间
2017-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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