换一批
换一批BN-PAGE在棕色脂肪线粒体呼吸链超级复合体分析中的应用
Detection of brown adipocyte mitochondrial respiratory chain supercomplexes by blue native polyacrylamide gel electrophoresis
摘要目的 建立一种敏感、特异的棕色脂肪线粒体超级复合体(supercomplexes,SCs)分离及活性检测方法,有助于了解棕色脂肪线粒体的功能.方法 分离并纯化小鼠棕色脂肪线粒体.采用蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(blue native polya-crylamide gel electrophoresis,BN-PAGE)分离不同大小的线粒体SCs.经考马斯亮蓝染色和免疫印迹分析各组分的表达情况.将凝胶置于不同的底物液孵育,根据显色反应确定线粒体复合物的酶活性.结果 成功提取棕色脂肪线粒体.考马斯亮蓝染色和免疫印迹结果显示棕色脂肪线粒体SCs清晰可见,分子量在720～1236 kD之间,与预期相符.棕色脂肪线粒体SCs在复合物Ⅰ或复合物Ⅱ的底物液中呈紫色,在复合物Ⅳ的底物液中呈棕色.结论 本研究建立的棕色脂肪线粒体SCs分析方法简便易行、结果直观,为肥胖及其相关代谢性疾病的研究提供了实验基础.
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