不同途径注射质粒微泡对超声微泡破碎技术介导EGFP基因在兔骨缺损处转染的影响
Effect of different injection routes of plasmid-microbubble suspension on EGFP gene transfection in bone defect using ultra-sound-mediated microbubble destruction
摘要目的 探讨超声微泡破碎技术介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因在兔骨缺损处转染时,不同途径注射质粒微泡混悬液对转染效率及局部组织的影响.方法 3 月龄新西兰大白兔 10 只,制备右尺骨骨缺损模型,按照随机数字表法分为静脉组和断端间组(n=5).静脉组和断端间组造模后第 10 天分别经耳缘静脉或骨缺损断端间向兔体内注射携带EGFP基因的质粒微泡混悬液(0.3 ml/kg).在超声频率 1MHz,超声强度 1.0 W/cm2,占空比20%条件下,对两组骨缺损部位超声辐照 1 min,进行EGFP基因转染.在基因转染后 1 周时处死兔,于骨缺损处获取标本制作切片,荧光染色观察各组EGFP表达情况.采用病理图像分析软件分析计算平均光密度.HE染色观察断端间软组织病理特点.结果 静脉组和断端间组均观察到绿色荧光蛋白表达.断端间组平均光密度高于静脉组,差异有统计学意义(0.0345±0.0028 vs 0.0004±0.0001,P<0.05).表达绿色荧光蛋白的细胞主要为骨骼肌细胞,各组未见细胞坏死征象.结论 超声微泡破碎技术介导EGFP基因在兔骨缺损处转染时,其效率受不同途径注射质粒微泡混悬液的影响,骨缺损断端间直接注射优于静脉注射.
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