换一批摘要目的 构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达.方法 通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况.结果 测序结果与之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功.Western blotting结果显示,转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达.结论 pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功.
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关键词
血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3真核表达载体聚合酶链式反应限制性内切酶HEK293细胞载体构建serum and glucocorticoid induced protein kinase 3eukaryotic expression vectorpolymerase chain reactionrestriction endonucleaseHEK293 cellsvector construction
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DOI
10.13753/j.issn.1007-6611.2024.07.006
发布时间
2024-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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