换一批抗Claudin18.2单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法的建立
Development of a method for determinating ADCP potency of anti-Claudin18.2 monoclonal antibody
摘要目的 建立抗Claudin18.2单抗(mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)生物学活性检测方法.方法 以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,HEK293T-Claudin18.2细胞系作为靶细胞,通过萤光素酶检测系统(One-GloTM Luciferase Assay System)检测抗Claudin18.2单抗的ADCP生物学活性,并进行实验参数优化与方法学验证.结果 抗Claudin18.2单抗在该报告基因法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D.方法经多个实验参数筛选和优化,确定抗体工作浓度为0.02～200 000 ng/mL,靶细胞和效应细胞的接种量均为每孔5×104个,诱导时间为6 h.该方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(48.90±2.36)%、(71.87±2.62)%、(99.64±2.12)%、(135.42±1.12)%和(151.16±6.91)%;回收率为96%～108%,RSD均小于6%,线性检测范围为50%～150%.结论 本研究成功建立基于报告基因的抗Claudin18.2单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗Claudin18.2单抗ADCP生物学活性的评价方法.
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关键词
抗Claudin18.2单抗抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性转基因细胞报告基因优化验证anti-Claudin18.2 monoclonal antibodyantibody-dependent cell-mediated phagocytosisbiological activitytrans-genic cellreporter geneoptimizationvalidation
分类号
R917（药物分析）
栏目名称
DOI
10.13753/j.issn.1007-6611.2025.06.015
发布时间
2025-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
药品监管科学全国重点实验室项目（2023SKLDRS0121）
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