换一批抗新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白单链抗体库的构建
Construction of single chain antibody library against spike S protein of COVID-19 mutant JN.1
摘要目的 构建抗新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白的单链抗体库.方法 新冠病毒变异株刺突S蛋白抗原免疫Balb/c小鼠,提取脾脏RNA,PCR扩增出单链抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),重叠延伸PCR构建scFv基因,将其插入噬菌体载体pCANTAB5E构建重组质粒,转入E.coli TG1感受态细胞,建立噬菌体展示pCANTAB5E-scFv抗体库.经培养获得初级噬菌体抗体库并测定其库容,随机挑选出单克隆抗体库进行PCR鉴定,进行多轮扩增与淘选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析和ELISA鉴定.结果 经琼脂糖电泳发现在250～500 bp之间出现目的条带,VH和VL片段样本长度分别为360 bp和339 bp,与预期长度相符;重叠延伸PCR构建scFv长度与预期片段792 bp大小相符.菌落PCR扩增鉴定重组率为90%,初级噬菌体抗体库库容为5×1012 cfu,经过4轮筛选富集后抗体库库容为2×10-6 cfu.重组质粒测序结果显示,scFv大小为792 bp,共编码264个氨基酸,通过VBASE2数据库分析抗新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白单链抗体VH和VL基因序列都存在3个互补决定区(CDR)和4个骨架区(FR).经ELISA检测后,筛选出3株阳性克隆噬菌体.结论 本研究成功制备新冠病毒变异株JN.1刺突S蛋白单链抗体库,为进一步研究感染新冠病毒变异株JN.1的诊断和靶向生物治疗奠定基础.
更多相关知识
关键词
JN.1变异株刺突蛋白(S蛋白)单链抗体(scFv)抗体库构建噬菌体展示技术高通量筛选中和抗体SARS-CoV-2 variant JN.1spike S proteinsingle-chain antibody(scFV)antibody library constructionphage display technologyhigh-throughput screeningneutralizing antibody
分类号
R392.33（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.13753/j.issn.1007-6611.2025.08.005
发布时间
2025-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览0
- 被引1
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
