LNA-taqman探针实时荧光PCR快速检测CYP4F2-C1347T,CYP2C9*3,VKORC1-C1173T与VKORC1-G1639A基因多态性方法的建立

Establishment of LNA-taqman Quantitative Real-time PCR for Detecting CYP4F2-C1347T,CYP2C9*3,VKORC1-C1173T and VKORC1-G1639A Genes Polymorphism

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摘要目的建立一种基于 LNA-taqman探针实时荧光PCR检测华法林剂量相关基因型维生素 K单氧酶 CYP4F2,维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)和细胞色素 P4502C9(CYP2C9)的方法.方法针对 CYP4F2-1347C>T,CYP2C9*3,VKORC1-1173C>T与 VKORC1-1639G>A四个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别设计一套等位基因特异性探针与引物,并对LNA-taqman探针特异性进行评价.提取150例接受华法林治疗患者外周血样本基因组DNA进行检测,同时对部分实时荧光 PCR产物样品进行验证.结果 ①LNA-taqman探针检测方法特异性高,没有交叉性.②150例患者中,CYP4F2-1347C>T基因型CC,CT和TT分别有87,56和7例,各占58%,37.3%和4.7%;CYP2C9*3基因型*1/*1和*1/*3分别有142和8例,各占94.7%和5.3%,未检出纯合子*3/*3基因型;VKORC1-1173C>T基因型TT,TC和CC分别有127,20和3例,各占84.7%,13.3%和2%;VKORC1-1639G>A基因型AA,AG和GG分别有124,23和3例,各占82.7%,15.3%和2%.结论基于 LNA-taqman探针的实时荧光PCR分型方法具有操作简便,价格低廉,结果准确可靠等特点,适于临床实验室对CYP4F2,CYP2C9*3,VKORC1的基因分型.