换一批基于MGB探针法荧光PCR检测手足口病病原的研究
Development of Fluorescence PCR for Detection of Hand Foot Mouth Viruses with MGB Probe
摘要目的 建立一种能同时检测EV71型、CA16型及其它肠道病毒的荧光PCR检测方法,主要用于手足口病病原的快速检测.方法 针对肠道病毒的保守基因设计特异性引物和探针序列,优化荧光RT-PCR反应体系,构建标准的阳性质控模板,建立标准曲线,研究产品的检测限、重复性、特异性;同时对2015年6月份收集的26份阳性样品和10份阴性样品进行检测.结果 试验得到了阳性重组质粒,线性范围在8×102 copics/μl～8×108 copies/μl范围内检测结果良好;优化后肠道病毒EVUN上下游引物和MGB探针浓度分别为0.50,0.50,0.30 μmol/L,RT-PCR反应条件为:42℃30 min,95℃3 min;95℃5 s,60℃35 s,45个循环.检测限达到800 copies/μl,变异系数CV≤5％,重复性好,特异性良好,与其他传染病毒无交叉反应;用该检测方法检测26份临床阳性样本和10份阴性样本,阳性检出率为100％(26/26),阴性检出率为100％(10/10).结论 试验所建立的荧光PCR检测方法,可用于临床对手足口病病原的快速检测.
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DOI
10.3969/j.issn.1671-7414.2018.01.032
发布时间
2018-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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