基于液相芯片技术建立快速检测6种临床常见血流感染厌氧菌的方法及评价

Establishment and Evaluation of A Rapid Detection Method for 6 Common Clinical Infected Anaerobic Bacteria in Blood Stream by Liquid Phase Chip Technology

二维码有效期 120s

摘要目的基于液相芯片技术建立一种可同时快速检测6种临床常见血流感染厌氧菌的方法.方法通过GenBank寻找脆弱拟杆菌、厌氧消化链球菌、具核梭杆菌、中间普雷沃菌、产气荚膜梭菌和痤疮丙酸杆菌的16S rDNA基因序列,经序列比对分析,选择菌内保守菌间特异的区域作靶序列,使用Primer 5.0软件设计特异性引物及探针,建立不对称多重PCR扩增体系,将PCR产物与偶联核酸探针的荧光微球混合物进行杂交,建立一种多重检测方法,并对该方法的特异度、灵敏度和重复性进行评价.收集2020年6月～2022年5月东莞市厚街医院阳性血厌氧培养瓶84例及阴性培养瓶16例,应用建立的方法进行检测,结果与传统培养法进行比较.结果 6种厌氧菌靶基因序列经PCR扩增后,电泳成像清晰可见6条目标条带;经反应体系优化,生物素标记与非标记引物浓度比为4:1时,选择退火温度56℃进行多重扩增,加入5μl PCR产物,52℃温育20 min检测效果最佳;各目标序列荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)>1000,无非特异性信号;最低检测限可达103cfu/ml～104cfu/ml;当菌液浓度为105cfu/ml时,批内及批间的变异系数分别在7.38％和11.10％以下;100例临床样本中6种厌氧菌的检测结果与培养法一致.结论成功建立一种快速、简便、高效的液相芯片方法,可同时检测6种常见血流感染厌氧菌.