换一批EGFP报告基因PiggyBac载体在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系电转染条件优化
Optimization of Electrotransfection Conditions of EGFP Reporter Gene PiggyBac Vector in Triple Negative Breast Cancer MDA-MB-231 Cell Line
摘要目的 设置不同电转染条件,探讨含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因稳定转入人乳腺癌细胞MDA-MB-231 细胞的优化条件.方法 构建含EGFP报告基因的PiggyBac(PB)转座子系统,并控制电转染MDA-MB-231 细胞时的波形、电压、电击时间、电击次数、质粒浓度、细胞密度、转座子与转座酶比例等转染条件,采用流式细胞术荧光异硫氰酸荧光素(FITC)通道检测其转染效率,并于激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光蛋白表达情况,验证EGFP报告基因电转染效率与表达情况,分析不同电转染条件下MDA-MB-231 细胞的电转效率.结果 MDA-MB-231 细胞的电转染优化条件为电压280V,波形为指数波,电击1次,转座子质粒浓度1 000 ng/μl左右,转座子比转座酶质量比例1:1,细胞数量为 2×106 个,电转染率可达 60.23%±5.63%,且MDA-MB-231 细胞状态良好.结论 成功优化MDA-MB-231细胞的电转染条件,达到稳定高效转染,为MDA-MB-231 细胞株的相关基础研究提供高效电转实验参数.
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关键词
三阴性乳腺癌电转染MDA-MB-231PiggyBac转座子triple-negative breast cancerelectrotransfectionMDA-MB-231PiggyBac transposon
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-7414.2025.03.035
发布时间
2025-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
北京中医药大学高层次人才科研启动经费项目（9011451310032）
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