莱菔素调控ANO1/LXR通路降低食管癌细胞胆固醇代谢并抑制侵袭迁移的实验研究
Experimental Study of Sulforaphene Regulation of the ANO1/LXR Pathway to Reduce Cholesterol Metabolism and Inhibit Invasion and Migration in Esophageal Cancer Cells
摘要目的 探究莱菔素调控钙激活氯通道蛋白1(ANO1)/肝X受体(LXR)通路对食管癌细胞侵袭迁移及胆固醇代谢物水平的影响及可能机制.方法 培养人正常食管细胞(HEEC)、人食管癌细胞EC109、KYSE510、KYSE150、KYSE30及TE-11,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中ANO1与LXR的mRNA水平,筛选出EC109细胞为后期研究对象.使用不同浓度莱菔素干预EC109细胞,CCK-8试剂盒检测EC109细胞活性,筛选出20μmol/L莱菔素为后续研究浓度.继续培养EC109细胞,分组为食管癌组、莱菔素组及过表达ANO1组.Transwell实验、划痕实验检测EC109细胞侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测EC109细胞中ANO1与LXR的蛋白水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测EC109细胞中胆固醇含量;免疫荧光染色检测EC109细胞中代谢相关蛋白ATP结合盒转运体-1(ABCA1)、ATP枸橼酸裂解酶(ACLY)、肽酰脯氨酰异构酶B(PPIB)蛋白水平.结果 与HEEC细胞相比,食管癌细胞EC109、KYSE510、KYSE150、KYSE30及TE-11中ANO1 mRNA表达增加,LXR mRNA表达减少,差异具有统计学意义(F=90.77、59.76,均P<0.05),其中EC109细胞的ANO1与LXR表达最为显著,作为后期研究对象.使用不同浓度莱菔素(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理食管癌细胞EC109 48h,随着莱菔素浓度的增加,食管癌细胞活性逐渐降低,差异具有统计学意义(F=454.80,P<0.05),其中20μmol/L约为半数细胞活性抑制浓度,因此选该浓度继续后续实验.与食管癌组相比,莱菔素组食管癌细胞的侵袭及迁移能力降低,ANO1蛋白表达减少,LXR蛋白表达增加,胆固醇含量及代谢相关蛋白ABCA1、ACLY、PPIB蛋白表达减少,差异具有统计学意义(t=7.22~17.70,均P<0.05);与莱菔素组相比,过表达ANO1组食管癌细胞ANO1蛋白表达增加,LXR蛋白表达减少,胆固醇含量及代谢相关蛋白ABCA1、ACLY、PPIB蛋白表达增加,差异具有统计学意义(t=6.11~10.87,均P<0.05).结论 莱菔素可调控ANO1/LXR通路抑制食管癌细胞侵袭迁移能力,这可能与该通路调控胆固醇代谢物水平相关.
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