基于金属有机框架材料ZIF-8构建荧光适配体传感器用于血液中PD-L1检测的新方法
A New Method to Construct a Fluorescent Aptamer Sensor based on Metalorganic Frameworks ZIF-8 for PD-L1 Detection in Blood
摘要目的 基于金属有机框架材料(MOFs)沸石咪唑酯骨架-8(ZIF-8)来构建荧光适配体传感器,开发一种相对简单、实时、无创、稳定的血液中程序性死亡配体1(PD-L1)检测新方法.方法 利用ZIF-8作为荧光淬灭剂,结合核酸适配体对靶标的特异性识别,构建用于检测血液中PD-L1蛋白的荧光适配体传感器.对淬灭时间、反应温度、缓冲液的pH值等进行条件优化,评价干扰实验,建立以牛胎血清以及健康者和肿瘤患者血清为基础的荧光传感平台,验证该传感器的稳定性.通过荧光恢复率与PD-L1浓度之间的关系,建立线性方程来定量测量PD-L1蛋白浓度.结果 基于ZIF-8构建的荧光适配体传感器的方法检测PD-L1蛋白,在最优条件下,PD-L1蛋白在低浓度时与F/F0有良好的线性关系,相关系数r2为0.909 8,线性方程为:F/F0=0.013 04×CPD-L1+1.452(C为PD-L1蛋白浓度,单位为ng/ml),线性范围1~150 ng/ml,实际检测下限为1ng/ml.对同家族的B7-H3、B7-1人重组蛋白及血清中其他肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原(CA125、CA199)在相同体系下评估,该传感器对PD-L1具有更好的特异性.在胎牛血清中的回收率100.16%~125.1%,肿瘤患者与健康人血清中PD-L1蛋白浓度相比,前者F/F0明显高于后者(2.97±0.49 vs1.23±0.20),差异具有统计学意义(t=10.382,P<0.001).结论 基于金属有机框架材料ZIF-8构建的荧光适配体传感器检测血液中PD-L1的新方法表现出较高的选择性和特异性,为建立有效的临床检测方法提供依据.
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