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锁环探针荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌耐药性及耐药突变基因的应用研究

Application Research of Lock-loop Probe Fluorescence Quantitative PCR Technology for Detecting Drug Resistance and Resistance Mutation Genes in Mycobacterium Tuberculosis

摘要目的 分析锁环探针荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性及耐药突变基因的临床应用价值.方法 收集2021年1月~2024年5月广东医科大学附属东莞松山湖中心医院165例涂阳肺结核患者痰液标本,均行痰涂片镜检、MTB培养/鉴定、比例法药敏试验及基于锁环探针的荧光定量PCR技术检测利福平(RFP)、异烟肼(INH)耐药性及耐药基因突变位点.以比例法药敏试验结果为参考标准,评价锁环探针荧光定量PCR技术检测耐药MTB的效能.结果 经分离培养证实151株为MTB,比例法药敏试验检出RFP耐药36株,INH耐药42株.锁环探针荧光定量PCR技术检出RFP、INH耐药,与比例法药敏试验检测结果差异无统计学意义(χ2=0.018、0.067,均P>0.05).以药敏试验为参考,锁环探针荧光定量PCR技术检测RFP耐药的敏感度、特异度、准确度分别为91.67%(33/36)、98.26%(113/115)、96.69%(146/151),检测一致性Kappa值为0.895;检测INH耐药的敏感度、特异度、准确度分别为83.33%(35/42)、95.41%(104/109)、92.05%(139/151),检测一致性Kappa值为0.867.锁环探针荧光定量PCR技术检出RFP耐药菌株rpoB基因突变中96.97%为单一位点突变,以531位点突变为主约占57.58%,其次为526位点突变约占27.27%;检出INH耐药菌株katG/INH A基因突变,以katG 315位点突变为主,其中80.56%为katG单一位点突变,16.67%为INH A单一位点突变.结论 涂阳肺结核患者应用锁环探针荧光定量PCR技术行痰标本RFP、INH耐药筛查具有较高的诊断效能,可作为临床快速诊断耐药基因位点突变及筛查耐药结核病的补充手段,为临床诊疗提供依据.

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