换一批急性髓系白血病CBFB::MYH11融合基因qPCR检测候选标准品的构建与性能评价
Development and Performance Evaluation of Candidate Reference Materials for qPCR Detection of the CBFB::MYH11 Fusion Gene in Acute Myeloid Leukemia
摘要目的 研制急性髓系白血病(AML)CBFB::MYH11融合基因qPCR检测候选标准品,为临床检测标准化提供有效技术支撑.方法 构建包含CBFB::MYH11融合基因和内参基因ABL1(比值1:1)的重组质粒,优化稀释液基质,通过重量法制备覆盖常规临床检测范围的6个浓度水平候选标准品.依据ISO33405:2024和ISO17511:2020评估候选标准品的均匀性与稳定性,并组织8家实验室使用3种品牌数字PCR仪联合定值,计算定值结果的扩展不确定度(k=2).结果 以添加5～50ng/μl鲑鱼精DNA的T1E0.01缓冲液作为稀释液,样品在20℃下可稳定保存至少7天(t=1.90、0.40,均P>0.05).以优化后缓冲液(添加30ng/μl鲑鱼精DNA的T1E0.01缓冲液)制备了6个浓度水平样品,各170支.单因素方差分析显示各浓度水平样品的均匀性良好(F=0.70～1.50,均P>0.05).稳定性研究显示,该样品在4℃下可稳定保存4周(t=-1.45～1.82,均P>0.05),在-20℃下可稳定保存至少3个月(t=-1.83～1.35,均P>0.05),但禁忌反复冻融(A～E组:t=2.43～10.78,均P<0.05).联合定值结果显示该批标准品可覆盖100～105拷贝/μl的宽线性范围,合成相对扩展不确定度平均值为13%.结论 制备的CBFB::MYH11融合基因候选标准品的均匀性和稳定性结果符合相关标准要求,量值扩展不确定度接近国际标物水平,可为AML相关临床分子检测的标准品制备提供参考依据.
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关键词
急性髓系白血病CBFBMYH11融合基因数字PCR候选标准品acute myeloid leukemiaCBFBMYH11 fusion genedigital PCRcandidate reference material
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-7414.2026.03.003
发布时间
2026-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技重大专项（2024ZD0523701）
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