换一批共表达NEP1-40和PRP-1多顺反子重组scAAV的构建
Construction of Multicistronic scAAV containing the FMDV 2A cleavage factor and co-expressing NEP1-40 and PRP-1
摘要目的：构建共表达NEP1‐40和PRP‐1多顺反子重组双链腺相关病毒（scAAV）。方法：PCR扩增NEP1‐40、PRP‐1及FMDV2A的cDNA，建立NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1嵌合肽cDNA。两端加入Flag肽和6×His肽后合成融合基因cDNA，克隆到PES载体构建出重组质粒PES／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。双酶切重组质粒PBV220‐NT4‐NAP和PES／NEP1‐40‐FM‐DV2A‐PRP‐1，连接得到重组质粒pBV220‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。以腺相关病毒pSS‐CMV构建双链腺相关病毒穿梭质粒ssAAVpSSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。经细胞内同源重组得到共表达NEP1‐40和PRP‐1的重组双链腺相关病毒scAAVpSSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。测定病毒滴度并利用鸡胚背根神经节检测其生物活性。结果：克隆了共表达NEP1‐40和PRP‐1的多顺反子融合基因cDNA，基因测序及核苷酸序列同源性比较结果与设计序列一致；构建了重组质粒pBV220‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1，酶切鉴定、核酸序列测定结果与理论值一致；重组的双链腺相关病毒scAAVpSSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1应用于鸡胚背根神经节显示明显促进神经突起生长。结论：成功构建了共表达NEP1‐40和PRP‐1的重组双链腺相关病毒scAAVp SSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1，并显示出促进鸡胚背根神经节神经突起生长作用。
更多相关知识
关键词
富含脯氨酸多肽NEP1-40口蹄疫病毒多顺反子载体自互补型腺相关病毒Proline-rich peptide PRP-1NEP1-40Foot and mouth disease virusMulticistron-ic vectorSelf-complementary AAV
分类号
R392.3（医学免疫学）
DOI
10.3969/j.issn.1000-7377.2015.03.002
发布时间
2015-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
陕西省科技研究发展(攻关)计划项目（(2011K12-12)）
- 浏览278
- 被引0
- 下载20
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
