miR-181a吸附海绵载体改善肝细胞胰岛素抵抗作用研究

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摘要目的：构建对肝癌细胞系 HepG2中内源性成熟miR‐181a具有的抑制作用的特异性吸附海绵载体（miR‐181a‐sponge），验证其在葡萄糖胺诱导的 HepG2细胞胰岛素抵抗模型中改善胰岛素敏感性的作用。方法：针对成熟人源 miR‐181a的序列，设计在9‐12位发生突变的反义序列，并重复7个拷贝，串联至pEGFP‐C2真核表达载体及pGL3‐Promoter载体中，通过双荧光素酶报告基因系统验证该吸附海绵的效果；同时在葡萄糖胺诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型中转染miR‐181a吸附海绵载体，检测细胞对胰岛素刺激的应答效果。结果：pEGFP‐C2‐181a‐SP载体可以成功的在细胞中表达，其绿色荧光呈阳性。双荧光素酶报告基因系统显示，pEGFP‐C2‐181a‐SP载体可以显著抑制外源性miR‐181amimics的活性（P＜0．05）。Western blot结果显示转染pEGFP‐C2‐181a‐SP载体可以改善葡萄糖胺诱导的 HepG2胰岛素抵抗细胞模型对胰岛素的应答。结论：miR‐181a吸附海绵载体策略可以成功的诱导吸附miR‐181a ，构建的pEGFP‐C2‐181a‐SP载体基因显著增加HepG2细胞的胰岛素敏感性，为改善miR‐181a导致的肝细胞胰岛素抵抗提供了潜在的解决方案，有可能成为2型糖尿病治疗的新策略。